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'''NMT技术原理(以液泡H+流速测定为例)''' 从烟草叶片细胞中分离出完整的液泡,可以在显微镜下清晰地观察到,直径为15-40 µm。把含有液泡的溶液加入到用多聚赖氨酸处理过的盖玻片上静止3-5 min,然后换上新鲜的测试液清洗1次,再加入新鲜的测试液,然后在非损伤微测系统上进行测量。正常情况下,液泡膜没有明显的Na<sup>+</sup>和H<sup>+</sup>转运,当加入50 mM NaCl后,胞外的Na+浓度显著提高,激活了液泡膜上的Na<sup>+</sup>/H<sup>+</sup>交换体(NHX),导致Na<sup>+</sup>进入(黄色的点),H<sup>+</sup>排出(红色的点)。使用非损伤微测系统的H<sup>+</sup>选择性微电极在液泡膜外表面进行持续测定,离液泡膜表面的近点p1测定后运动到远点p2测定,然后回到p1,这样实时测定,可以获得两点之间的H<sup>+</sup>浓度差随时间变化的结果,p1和p2之间的距离是dx(已知,单位是µm),D<sub>0</sub>是H<sup>+</sup>在常温常压下的扩散常数。因此,通过Fick’s第一扩散定律(J=D<sub>0</sub>•dc/dx)计算得到H<sup>+</sup>的流速JH<sup>+</sup>,单位是pmol•cm<sup>-2</sup>•s<sup>-1</sup>,即每秒通过每平方厘米面积上的H+的数量(摩尔数,10<sup>-12</sup> mol)。 [[文件:原理.jpg]] 参考文献: 1. Jaffe LF and Nuccitelli R. An ultrasensitive vibrating probe for measuring steady extracellular currents. Journal of Cell Biology, 1974, 63: 614-628. 2. Kühtreiber WM and Jaffe LF. Detection of extracellular calcium gradients with a calcium specific vibrating electrode. Journal of Cell Biology, 1990, 110: 1565-1573. 3. Chen XY, et al. Modified noninvasive microtest electrophysiological technology for vacuolar H+ flux detection. Analytical Biochemistry, In Press, Corrected Proof, Available online 22 July 2011. ----- [[首页|返回上一级]]
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